注意事項(xiàng)：
. 接收到人支氣管成纖維細(xì)胞提取物說明書，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

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人支氣管成纖維細(xì)胞提取物【Human Lung: Normal Bronchial Fibroblast Cell Derivatives】
     人支氣管成纖維細(xì)胞提取物說明書人支氣管成纖維細(xì)胞提取物是從人原代支氣管成纖維細(xì)胞提取的，人原代支氣管成纖維細(xì)胞從正常人支氣管組織制備。正常人支氣管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。?

HPGD / 5-PGDH 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM    25 Test

SAA4 抗體 (PE), 鼠單抗  25 Test

N-Cadherin / CD325 / CDH2 抗體, 兔單抗 ELISA   IF  ICC/IF    50 µg

CD8a 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

Insulin Receptor / INSR / CD220 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

CD4 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 µg

SENP8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P   IF  ICC/IF    50 µg

ABCG2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 µg

Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 µg

SerpinA 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

人支氣管成纖維細(xì)胞提取物說明書4,5-二氟酞腈分子式：64.英文名稱：4,5- two fluorine phthalocyanine：34450-56-9分子量： C8H2F2N2

2-巰-5-并惡唑分子式：227.28英文名稱：2- mercapto -5- phenyl benzoxazole：737-99-2分子量： C3H9NOS

(RP,R′P)-,′-雙[(S)-Α-(二甲)芐]-2,2′-雙(二膦)二茂鐵分子式：820.774英文名稱：(RP, R 'P) -,' - bis [(S) - alpha (two dimethylamino) benzyl]-2,2 '- bis (two phenyl phosphine) Er Maotie：223725-09-5分子量：2C26H25NP.Fe

乙硫威砜分子式：257.3英文名稱：Ethyl benzene, benzene：53380-23-7分子量： CH5NO4S

新戊分子式：48.24英文名稱：New amylbenzene：007-26-7分子量： CH6

,3-二乙炔分子式：26.6英文名稱：,3- two：785-6-分子量： C0H6

,2-二溴四氟分子式：307.87英文名稱：,2- dibromo four -：827-08-7分子量： C6Br2F4

二乙二硫代甲酸鐵分子式：500.63英文名稱：Two ethyl two amino acid：3963-59-2分子量： C5H30FeN3S6

五味子乙素英文名稱：Fructus B分子式：400.46482分子量：C23H28O6：628-37-6

,'-雙(2,4-二硝)-4,4'-二氯聯(lián)吡分子式：56.29英文名稱：,'- bis (2,4- two nitro phenyl) -4,4'- two：468-79-0分子量： C22H4Cl2N6O8

培養(yǎng)步驟：
人支氣管成纖維細(xì)胞提取物說明書對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。