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小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物圖片

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注意事項:
. 接收到小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物圖片,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞00X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 

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Mouse Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells Derivatives

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總RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA*鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mgRNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運輸cDNA, μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。        潛在的應(yīng)用: <>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。?

LRP0 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

ACBD7 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

DMP 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CALML3 抗體, 鼠單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

CD30 / TNFRSF8 抗體, 鼠單抗 FCM    50 µg

4-3-3 beta / YWHAB 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg

ALK-6 / BMPRB 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

PDGFRa / CD40a 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

LTC4S 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CD7 抗體, 兔單抗 WB   IP    50 µg

小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物圖片小鼠IgG-DAB顯色試劑盒 kit  盒

牛IgG干粉 00mg  支

Bromphenol Blue 溴酚藍(lán) 5g  瓶

Boc-D-Tyrosine Boc-D- 70642-86-3  20mg

DiO-Ac-LDL DiO標(biāo)記乙酰化低密度脂蛋白 500ug  瓶

Araloside X 遼東楤木皂苷X 3449-90-6  20mg

Mayer’蘇木素染液(免疫組化) 0ml  瓶

Jatrorrhizine Hydrochloride 鹽酸藥根堿 960383-96-4  20mg

膠片 8×0  盒

Limonin 檸檬苦素 80-7-8  20mg

Bavachinin 補(bǔ)骨脂二氫黃酮甲 9879-30-2  20mg

培養(yǎng)步驟:
小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞提取物圖片對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按:2到:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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